近日，重庆医科大学附属第一医院赵金秋教授团队在肝内胆管癌（iCCA）研究领域取得重要突破，其研究成果发表于国际肝病学顶级期刊 《Journal of Hepatology》：（题为：Distinct molecular pathways regulated by activated AKT and YAP signaling during intrahepatic cholangiocarcinoma progression: Roles of AKT and YAP during iCCA）。该研究首次系统解析了AKT和YAP两条关键致癌信号在iCCA进展中的不同分工，并揭示了YAP作为肿瘤免疫微环境核心调控因子的新功能。值得一提的是，研究团队使用金开瑞ChIP试剂盒，为证实YAP直接抑制靶基因RNF125的分子机制提供了关键性证据。
肝内胆管癌（iCCA）是一种恶性程度高、免疫治疗响应率低的难治性肿瘤。尽管AKT和YAP信号通路在iCCA中常被异常激活，但两者在肿瘤进展及肿瘤免疫微环境（TIME）调控中的具体作用尚不明确。
展开剩余84%该研究通过构建两种可诱导的iCCA小鼠模型，首次系统揭示了AKT与YAP的功能分工：AKT主导肿瘤代谢与增殖，其抑制可诱导iCCA完全消退；而YAP是维持肿瘤身份及调控免疫微环境的关键。机制上，YAP通过直接抑制抑癌基因RNF125促进肿瘤进展，并通过排斥T细胞、招募中性粒细胞构建免疫抑制屏障。重要的是，抑制YAP可将免疫“冷”肿瘤转化为“热”肿瘤，增加CD4⁺和CD8⁺ T细胞浸润。然而，这些浸润的T细胞表达PD-1，导致抗肿瘤功能受限。进一步研究表明，YAP抑制联合抗PD-L1治疗可协同增强肿瘤消退。
创新模型：可“开关”的双系统
团队巧妙构建了两个多西环素（Doxycycline）诱导的iCCA小鼠模型：
Akt/TRE-YAP模型：在恒定激活AKT的基础上，可随时“开关”YAP表达。
TRE-Akt/YAP模型：在恒定激活YAP的基础上，可随时“开关”AKT表达。
该模型设计使研究者能够在肿瘤形成后特异性关闭单一信号通路，实时追踪肿瘤的表型变化、细胞特性及微环境重塑，为明确 AKT 和 YAP 的独立功能奠定了实验基础。
核心发现一：AKT 与 YAP 存在共性作用，且功能分工明确
研究证实，AKT 与 YAP 并非完全独立的致癌通路，二者均是调控 iCCA 细胞增殖的关键因子，这是两条信号通路协同驱动 iCCA 发生的重要基础；同时，二者在 iCCA 进展中承担着截然不同的功能，存在明确的分工：
AKT主导代谢与增殖：关闭AKT信号（Akt-OFF）后，已形成的iCCA肿瘤几乎完全消退，小鼠获得显著的长期生存获益。RNA-seq 通路分析显示，AKT 主要调控肿瘤细胞的糖代谢、脂肪酸合成等代谢相关通路，其抑制会直接破坏肿瘤细胞的能量代谢平衡，导致肿瘤细胞增殖停滞、凋亡增加。
YAP维持肿瘤身份并塑造免疫微环境：关闭YAP信号（YAP-OFF）后，由于AKT信号持续存在，肿瘤虽缩小但逐渐转化为脂肪变性相关的肝细胞癌（steatosis-HCC），提示YAP是维持iCCA细胞身份的关键。同时，YAP-OFF显著增加了肿瘤内CD4⁺/CD8⁺ T细胞浸润，减少了Ly6G⁺中性粒细胞，表明YAP是构建免疫抑制屏障的“总工程师”。
核心发现二：YAP直接转录抑制抑癌基因RNF125
为进一步探究YAP调控免疫微环境的分子机制，团队通过RNA-seq筛选到在YAP-OFF后显著上调的基因——RNF125（图A）。公共数据库分析显示，RNF125在人类iCCA中低表达，且低表达与患者不良预后相关（图B-D）。那么，YAP是否直接结合RNF125启动子抑制其转录？
为回答这一问题，研究团队使用金开瑞生产的ChIP试剂盒进行了ChIP-qPCR实验。结果显示，YAP/TEAD转录复合物能够直接结合到RNF125基因启动子区域。这一证据确凿地证实了YAP对RNF125的转录抑制作用。后续Co-IP实验进一步揭示，YAP/TEAD通过招募NuRD复合物（含HDAC1、MTA2）实现转录抑制，揭示了YAP作为转录抑制因子的具体机制。
功能验证：在iCCA细胞系中敲低YAP/TAZ可上调RNF125表达（图E-F）；过表达RNF125则显著抑制细胞增殖（图G-H）并在小鼠模型中延缓肿瘤形成（图J-L）。以上结果确立了RNF125作为YAP下游关键抑癌基因的地位。
RNF125是YAP的直接靶点，YAP抑制肝内胆管癌（iCCA）的发展
核心发现三：YAP 调控免疫微环境的可逆性，且抑制 YAP 可将 “冷” 肿瘤转为 “热” 肿瘤
YAP 是调控 iCCA 免疫微环境的核心因子，其对免疫微环境的调控具有直接性和可逆性 —— 团队通过双向验证实验证实，YAP 抑制可显著增加肿瘤内 CD4⁺/CD8⁺ T 细胞浸润、减少 Ly6G⁺中性粒细胞，而重新激活 YAP 则会逆转该免疫重塑效应；同时结合 63 例人类 iCCA 组织 IHC 染色及 3 套 19 例患者的单细胞 RNA-seq 数据分析，验证了人类 iCCA 中 YAP/TAZ 激活与免疫抑制特征呈正相关，YAP 激活评分与 T 细胞浸润程度显著负相关。综上，YAP 激活是 iCCA 处于免疫 “冷” 状态的重要诱因，抑制 YAP 可有效打破免疫抑制屏障，将 “冷” 肿瘤转化为 “热” 肿瘤，为后续免疫治疗创造关键条件。
核心发现四：YAP抑制联合PD-L1阻断实现协同治疗
YAP-OFF虽能招募T细胞进入肿瘤，但这些T细胞高表达PD-1，处于耗竭状态（图A-B）这为联合免疫检查点阻断提供了理论基础。基于此，团队设计了联合治疗方案：YAP抑制（撤去多西环素）联合抗PD-L1抗体治疗。结果显示，联合治疗组小鼠肿瘤负荷显著低于单药组（图D-F），且肿瘤内CD4⁺/CD8⁺ T细胞浸润进一步增加（图G-H, J-K），提示YAP抑制可将“冷”肿瘤转化为“热”肿瘤，从而为免疫检查点抑制剂创造响应条件。
YAP抑制剂联合抗PD-L1免疫检查点阻断协同诱导肝内胆管癌肿瘤消退
研究意义与启示
本研究不仅厘清了AKT和YAP在iCCA中的独特分子通路，更确立了YAP作为肿瘤免疫微环境核心调节因子的地位。关键机制的阐明——特别是YAP直接抑制RNF125并招募NuRD复合物的发现——为开发YAP抑制剂联合免疫疗法提供了坚实的理论基础。
在这项突破性工作中，金开瑞ChIP试剂盒凭借其高灵敏度和特异性，成功助力研究者完成了关键的分子结合验证，使整个信号通路链条得以完整闭合。这正是高质量工具赋能基础研究的生动例证。
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